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 免疫組織染色(Immunohistochemistry)

服務簡述：包含檢體處理、切片製作，並根據需求對組織進行染色。

服務種類：

(1) 組織前處理：動物實驗後之組織灌流、採檢、固定、去鈣化以及修剪。

(2) 蠟塊或OCT塊製作：以石蠟進行包埋，或以OCT進行包埋(冷凍切片用)。

(3) 石蠟切片：切出厚度約3～4 um的石蠟切片。

(4) HE染色：以Hematoxylin (蘇木精)、Eosin (伊紅)進行組織染色，可初步確認組織型態的細節，包含是否有細胞死亡、是否有脂肪累積等等。

(5) IHC染色：以專一性的抗體對組織上目標蛋白進行染色，確認該蛋白在組織中的表現位置。

(6) 其他特殊染色(如PAS、collagen染色等。

(7) 全幅掃片：以顯微掃片機進行掃片，最高可達800倍數位放大。

(7) 量化分析：以image j進行訊號多寡的判讀。

使用材料

(1) 固定液可委託優服生物科技公司購買或客戶自行提供。

(2) 抗體部分可由客戶提供，或委託優服生物科技公司購買。

(3) 抗體外之染劑由優服生物科技公司購買。

交件時間：

約1～3週 (視不同組織而定)。

檢體種類：

(1)組織。

(2)蠟塊。

(3)石蠟切片。

服務流程：

(1)專人討論實驗流程，確認檢測項目、檢體類型、收件方式、前測試以及報價。

(2)先支付材料費或整體案件50%之訂金。

(3) IHC染色進行前必須要以HE染色先進行品管，確認組織無問題後才可繼續執行實驗。

(4)執行實驗。

(5)出具報告(以染好玻片為主，選擇掃片服務將出具軟體、原始檔等圖)

(6)支付尾款、結案。

常見QA：

1.不同組織的處理方式為何？

Ans：Rodent類可參考：

(1) Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice Part 1

(2) Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice Part2

這兩篇文獻當中包含各種組織如何進行處理、固定、以及切片方向等。

2. 染色的訊號過低？

Ans：

(1) 一般做免疫化學染色會進行抗體的濃度、incubation時間測試，根據data sheet上建議的稀釋倍率往上增加濃度或往下降低濃度，挑選合適的濃度後才進行正式染色。

(2) 若在做初染測試時，Data sheet建議的濃度染不出訊號，可能抗體降解、或該蛋白在組織中無大量表現。

(3) 其他切片上的問題：

a. 組織在染色過程中乾掉

b. 細胞膜的打洞不完全

c. 脫蠟的程序不完全

d. 抗原修復的程度不足

e. 組織固定時間過久 (over fix)

故在做IHC實驗前，前測試的步驟是必須的，確保所有條件皆完備。

3. 染色背景過高？

(1) 脫蠟不夠充足的情況下，可能造成背景較高，可延長脫蠟時間、確認Xylene是否新鮮配置。

(2) 組織中內生性的Peroxidase也會與substrate反應，產生高背景訊號，可使用3% H2O2溶液進行處理，使其失活。

(3) 抗體濃度過高或是Blocking不完全亦有可能造成高背景，可降低抗體濃度或是增加blocking的時間。

4.組織切片之品管？

(1) 一般會以HE染色進行判斷，確認組織型態是否完整、固定是否完全，建議在執行IHC實驗前，可執行HE染色先做判斷。