酵素結合免疫吸附分析法 Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA分析)
服務簡述：透過抗原抗體結合的特性，偵測檢體中特定的蛋白質或化合物
服務種類：
(1)三明治法ELISA：通常用於檢測發炎因子、胰島素等蛋白質。
(2)競爭法ELISA：通常用於檢測化學分子，如睪固酮、前列腺素等。
(3)Direct ELISA：將抗原直接coating，減少試劑浪費也降低與二抗交叉反應的可能。
使用材料：
(1)由客戶自行提供之套組(不限廠牌)。
(2)使用我們選定的套組之廠牌。
(3)客製化，不使用套組自行coating。
檢體種類：
(1)血清或血漿(視檢測標的需做調整)。
(2)細胞培養之supernatant、conditioned medium、Lysate (須留意萃取時若有用到RIPA等含detergent的裂解液，可能干擾實驗結果)。
(3)唾液。
(4)尿液。
(5)組織萃取液。
(6)其他特殊檢體
服務流程：
(1)專人討論實驗流程，確認檢測項目、檢體類型、收件方式、前測試以及報價。
(2)先支付材料費或整體案件50%之訂金。
(3)執行前測試 (以不同稀釋倍率確認檢體之濃度是否落在線性區間內，若濃度過高將稀釋檢體；若濃度過低，將standar多往下拉2個點)，並進行反饋與討論。
(4)執行正式實驗。
(5)出具報告(包含吸光值之Raw data、標準曲線以及計算好之濃度)
(6)支付尾款、結案。
常見QA：
1. 樣本濃度過高或濃度過低怎麼辦？
Ans：過高者透過前測試，抓合適的稀釋倍率，使其落在線性區間內，甚至有遇過稀釋倍率需達10000倍以上。
Ans：過低者的問題較多，分幾項討論：
(1) 有些發炎因子若在非急性期可能會遇到低到測不到的情況，可事先查找資料，並選擇靈敏度更高的套組 (通常會含有訊號放大試劑)。
(2) 若吸光值的訊號強度落於0與最低的standar之間，可將最低的standar再對半稀釋兩個點。
2. 稀釋後的檢體回乘後是否可與原液作比較？
Ans：通常比較難，根據過去的經驗，稀釋後的濃度與原液通常不會呈線性關係，原液若是飽和狀態，稀釋後回乘的數值通常會比較高。強烈建議每次實驗時所有的檢體應以同樣的倍率進行稀釋。
3. 實驗該怎麼做品管？
Ans：品管分成兩個面向：(1) 標準曲線 (2) CV值
(1) 標準曲線的好壞通常會從R square值去判斷，選用的點越多，可信度越高，通常R square值在95以上為可接受，在實驗穩定的情況下大多可做到R square在98以上。
(2) 若要計算CV值，樣本須至少進行2重複實驗，CV值的計算公式為：兩重複樣本的吸光值標準差 / 兩重複樣本的吸光值平均值x 100 (%)，標準曲線二重複的CV值在10% 以下為可接受範圍，樣本孔的CV值則在20%以下，若ELISA 套組中一盤有5個樣本發生CV值超過20%以上，一般會跟套組廠商進行客訴流程。
4. 標準曲線公式該選擇線性或四對數？
Ans：若所有的實驗都以線性公式去套用，很有可能R square值會在95以下，原因是因為標準品進行序列稀釋時，呈現線性關係的區間有一定限制，當濃度較高或較低時，濃度與吸光值的關係會改變，使得標準曲線的分布會趨近於S型曲線或是拋物線，甚至在高濃度時會有勾狀曲線的產生，而四對數、五對數公式則是對此現象進行修正，讓高吸光值與低吸光值計算出來的濃度更合理。
5. 為何同樣的套組，同樣的標準品，每次拉出來的標準曲線形狀不一樣，R square值也不一樣？
Ans：此為常見的現象，分成幾個面向解釋：
(1) 注意購買套組的Lot，有些供應商每批Lot出來的品質會有差異，務必要詳讀COA或data sheet上的標準品、抗體濃度。
(2) 套組的使用期限以及次數，一般ELISA商業套組的保存期限為半年，裡面的抗體、蛋白質會隨時間變質，若一個套組分多次做實驗，會發現標準曲線斜率會下降，越趨平緩。(所以大多的供應商在套組內也會放多管標準品或是設計可拆式的孔盤)
(3) 每次實驗的條件也會有影響，影響最鉅的無非是呈色時間與溫度，若以RT來看，台灣夏天的RT與冬天的RT可能會差到10度以上，就可能使反應的速率不一，造成差異。
而這些問題的解決辦法，無非是盡可能使實驗條件穩定，操作的人為同一人，反應時間、反應溫度盡可能一致，但至少，每次的標準曲線都真實反應該次實驗吸光值與濃度的關係。
6.如何確保檢體的最佳狀態？
Ans：不管哪種檢體，新鮮的最好，但如果收案的時間很長怎麼辦？
(1) 最新鮮的情況是採收下來的檢體若能在1週內檢測完，應以4 ℃的溫層作保存。
(2) 若需花時間收案，檢體採收下來後應保存在-80 ℃的溫層，盡量在6個月之內檢測完。檢體每經歷一次解冷凍都會使部分蛋白質降解，保存、運輸上需要注意。
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