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西方墨點法分析(Western Blotting)

服務簡述：透過電泳分離不同大小分子量之蛋白，並以專一性的抗體進行檢測，得知目標蛋白的表現量，或蛋白質磷酸化的程度。

服務種類：

(1)蛋白質萃取：以化學方式(RIPA buffer)或物理方式(sonicator)對組織或細胞進行均質，萃取總蛋白。

(2)BCA定量：以Thermo 23225 BCA定量套組計算樣本中蛋白質濃度。

(3)Coomassie blue之染色：電泳後以coomassie blue確認蛋白之表現量(無專一性)，後續可用做蛋白質身分鑑定之分析。

(4)Western Blotting之染色：電泳後，將蛋白質轉漬(transfer)到PVDF膜上，以專一性抗體染色，並以HRP二抗、高靈敏ECL呈色，最後以冷光照相系統拍攝結果圖。

使用材料

(1)抗體部分可由客戶提供，或委託優服生物科技公司購買，但須經過前測試。

交件時間：

約1～3週。

檢體種類：

(1)細胞(須提供至少10⁶顆細胞，若以藥物誘導細胞有抑制生長或死亡的情形，應提供10⁷顆細胞)，但應視不同細胞株、情況有所調整。

(2)組織。

服務流程：

(1)專人討論實驗流程，確認檢測項目、檢體類型、收件方式、前測試以及報價。

(2)先支付材料費或整體案件50%之訂金。

(3)執行實驗前進行蛋白品質之品管、抗體品質之品管。

(4)執行實驗。

(5)出具報告(BCA定量之圖表、提供原始掃描檔、提供以image j初步之量化分析圖。

(6)支付尾款、結案。

常見QA：

1.可否做除細胞或組織之外的檢體分析，如(1)細胞核(2)細胞膜蛋白(3)粒線體蛋白(4)分泌型蛋白？

Ans：需做另外的評估。

(1)核蛋白、膜蛋白、粒線體一般會需要多添購膜質分離套組、粒線體分離套組，所需準備的細胞數需要更多，應以專案執行。

(2)分泌型蛋白部分，有些可以ELISA偵測，以西方墨點法執行須考慮albumin等蛋白質的干擾。

2.西方墨點法實驗的品管？

Ans：分多階段品管。

(1) BCA定量為品管之第一關，確認蛋白質足量才往下執行實驗。

(2)前測試以internal control確認檢體無問題，同時確認抗體染色條件、位置是否正確。