優服生物科技有限公司

優服生物科技有限公司成立於2021年，主要服務對象為學校、醫院、生技公司等研究單位。

公司如其名，我們希望能提供優質的服務以及完整的問題解決方案。

YOU FU BIO 為我們自有之試劑品牌，選擇優質原料配置，希望為研究者提供便利、高品質的產品。 

除此之外，優服生物科技亦提供實驗技術服務，聘請博士級研究員，服務內容包含：

1. ELISA 酵素結合免疫吸附分析 (交付報告時間：1～2週)：點我看詳細介紹

免疫組織染色(Immunohistochemistry)

服務簡述：包含檢體處理、切片製作，並根據需求對組織進行染色。

服務種類：

(1) 組織前處理：動物實驗後之組織灌流、採檢、固定、去鈣化以及修剪。

(2) 蠟塊或OCT塊製作：以石蠟進行包埋，或以OCT進行包埋(冷凍切片用)。

Cluster of differentiation marker (CD marker)為免疫細胞膜上的蛋白質，有的可作為receptor或ligand，有的具有黏附功能、或進行細胞訊息傳遞。除此之外，我們也可以透過細胞表面的CD marker去分辨他的特性、功能，如大部分白血球細胞，會表現CD45這個CD marker，T細胞會表現CD3指標、B細胞則會表現CD19指標(Zola et al., 2007)。

以T細胞做更進一步的細分，輔助型T細胞通常會表現CD4；胞殺型T細胞通常會表現CD8，這兩群T細胞占了全部T細胞的大宗，在一些疾病當中，CD4 T細胞與CD8 T細胞的比例會有失衡的現象，如愛滋病，在持續發病的病人體內，可觀察到CD4陽性的輔助型T細胞有明顯的下降(Taylor et al., 1989)。

在以往的認知中，表現CD4的輔助型T細胞，通常不會表現CD8的指標，而表現CD8的胞殺型T細胞，則不會表達CD4的指標。然而同時表現CD8、CD4的T細胞是否存在呢？

答案是肯定的，CD4+/CD8+ double-positive (DP T cell)在早期，被認為是在T細胞發育過程中的一個過渡時期，當未成熟還未表現TCR的T細胞從bone marrow離開，進入到胸腺中，T細胞會在胸腺中決定未來的命運，是要成為表現CD4的輔助型T細胞或是表現CD8的胞殺型T細胞(Koch & Radtke, 2011)。其中調控T細胞命運的分子機制會牽涉到ThPOK以及Runx3兩個轉錄因子，ThPOK能夠抑制Runx3、perforin以及granzyme B等與CD8 T cell發育相關的蛋白質表現，並主導T細胞往CD4的發育方向行進，Runx3則相反，主導T細胞往表現CD8。(Egawa & Littman, 2008; Wang et al., 2008)。然而在(Mucida et al., 2013)的研究中也發現，表現CD4的輔助型T細胞在成熟後，仍具有可塑性。在許多的研究中也指出，癌症患者中，DP T cell的比例會較一般正常人要來得多，如在Bohner等人於2019年的研究中發現，在泌尿道相關的癌症中，DP T cell的比例要較一般正常人來得多，且這些DP T cell 所分泌的cytokine以及特性，接近於Th2的細胞群(Bohner et al., 2019)。

Fig.1 . 泌尿道相關的癌症中，DP T cell的比例要較一般正常人來得多。

講到如何挑選流式細胞儀抗體以及染劑，首先需要知道有兩大重點，第一是研究者想要看甚麼？以及單位中硬體設備的限制。

今天若目標明確，要看外周血當中NK細胞的數量與比例，便會需要對代表NK細胞的marker進行染色，如CD16、CD56以及CD3；若想看T細胞與B細胞的分型，便需染CD45、CD3、CD19、CD4、CD8這幾個surface marker；若想區分細胞的死活，則會選擇一系列相關的核酸染劑(如PI、DAPI、7-AAD等)

以硬體設備來說，我們經常聽到流式細胞儀的規格，可能是一雷四色、二雷六色甚至是三雷十五色，這些雷射代表儀器所配備的激發光源，而這些顏色則代表儀器所配置的通道或是濾片，這些幾雷幾色，在先天上就決定了我們的實驗該如何設計、以及會遇到如何的限制。

在先前的文章中，有提到流式細胞儀的光學概念，每種螢光物質，他吸收的波段、激發出來的波段皆不同，儀器配備哪支雷射，自然只能挑選能被該雷射激發的螢光物質，以最常見的488 nm藍光雷射為例，我們能夠選擇會被488 nm激發的染劑，如FITC、PE等，相反我們不會去選擇APC作為染劑(因為最大激發波段不對)，或是也不會選擇應由405 nm雷射激發的pacific blue染劑。

所以第一步驟，確定雷射，以及有配備濾片的通道，接著便能開始確認，有哪幾種螢光物質是可以選擇的，可參考Fig.1筆者彙整的常用染劑，以及相對應激發、發散之波長。

黴漿菌是目前發現最小，且可自行複製的病原體，黴漿菌的大小介於0.15～0.3 μm之間，有機會通過實驗室中過濾使用的小飛碟(0.22 um孔徑)，其基因組的大小為0.58–2.20 Mb 與大腸桿菌的 4.64 Mb要小的很多(Rottem et al., 2012)。黴漿菌並非黴菌，在分類學上被歸類為細菌，但與一般常見的細菌不同，因黴漿菌不具有細胞壁，在細胞培養中常添加的抗生素penicillin對其無效，除此之外，因黴漿菌缺乏一些代謝相關的酵素，無法執行TCA循環，必須依附其他生物細胞才可生存。

在各種黴漿菌中，M. orale、M. arginini、M. hyorinis、M. fermentans、A. laidlawii、M. hominis，為較常見的汙染菌種，其汙染源可能來自於實驗室內共用的medium、PBS、pipettman、操作人員(Fig.2.)等，如M. fermentans、M. hominis便存在於人的口腔、呼吸道中，甚至是培養液中添加的Fetal bovin serum (FBS)血清製劑，都可能一開始就含有這些黴漿菌(FBS中M. arginini、A. laidlawii較為常見)，豬來源的Trypsin也常有M. hyorinis的汙染(Nikfarjam & Farzaneh, 2012)。

Fig. 1. 細胞培養中常見的mycoplasma，其自然宿主以及汙染菌種的發生率(Nikfarjam & Farzaneh, 2012)。

Fig.2. 常見的細胞培養汙染來源，以及微生物的含量(Nikfarjam & Farzaneh, 2012)。

在細胞培養中，黴漿菌有多變的形狀，如球狀、長頸形狀等(Fig.3 .)，其尖端具有幫助貼附的胞器以及蛋白質，會使黴漿菌能貼附在宿主細胞表面(Fig.4.)，甚至能夠穿透並進入宿主細胞內(Fig.5.)。

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啟動細胞內的自毀按鈕

    當體內的細胞累積突變造成生理機能失控時，體內會啟動一連串的訊息傳遞路徑，讓這些不正常的細胞自然的死亡，這個過程叫做細胞程序性死亡，或稱細胞凋亡(apoptosis)，細胞凋亡除了發生在清除老化、突變等異常的細胞外，在發育的過程中也扮演重要的腳色，比如說為了讓手掌的五根手指分開，就必須讓某些細胞凋亡，避免手指黏在一起，這是體內再正常不過的生理機制。

至於細胞凋亡是如何啟動的呢？細胞凋亡可分為內途徑(intrinsic pathway)以及外途徑(extrinsic pathway)

內途徑部分，當細胞受到壓力，如自由基、UV照射、來自其他細胞的訊息分子刺激(如接收到促使死亡的訊息、失去環境中促使細胞分裂、生長的訊息)，或是受到內在DNA複製出錯、細胞毒性蛋白質的堆積等，都有可能啟動細胞凋亡的機制，這個過程是被精密調控的，也有各種蛋白質參與其中，如抑制細胞凋亡的Bcl2蛋白，促進細胞死亡的Bax蛋白，平常Bcl2與Bax在細胞內會達到平衡，當平衡被破壞時，如促使細胞生長的激素EGF下降，Bcl2會減少；或受到UV照射，Bax轉錄以及表現的量增加時，細胞凋亡即會被啟動(Wu et al., 2008)。

        Bax的活化，會使粒線體穿孔，使粒線體釋放出鈣離子與cytochrom c，cytochrom c會與APAF-1、pro-caspase 9蛋白形成凋亡小體，這時候粒線體的膜電位會下降。凋亡小體會催化出有活性的caspase 9，接著使下游的caspase 3、caspase 7活化，同時也讓磷脂絲胺酸(Phosphatidylserine, PS)由細胞膜內側翻轉到細胞膜外側。在凋亡的晚期，caspase 3與caspase 7會去切DNA等核酸，使DNA片斷化，同時caspase 3也會截切PARP-1，使其無法修復損傷的DNA，除此之外，此時的細胞膜通透性也跟著上升。

西方墨點法分析(Western Blotting)

服務簡述：透過電泳分離不同大小分子量之蛋白，並以專一性的抗體進行檢測，得知目標蛋白的表現量，或蛋白質磷酸化的程度。

服務種類：

(1)蛋白質萃取：以化學方式(RIPA buffer)或物理方式(sonicator)對組織或細胞進行均質，萃取總蛋白。

(2)BCA定量：以Thermo 23225 BCA定量套組計算樣本中蛋白質濃度。